大鼠胰岛素（Insulin）ELISA试剂盒说明书
点击：次 日期：2017-1-1
试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
1份
封板膜
2片（48）
2片（96）
密封袋
1个
1个
酶标包被板
1×48
拉力试验机text-align:center">1×96
2⑻℃保存
标准品：18mU/L
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2⑻℃保存
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2⑻℃保存
酶标试剂
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2⑻℃保存
样品稀释液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2⑻℃保存
显色剂A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2⑻℃保存
显色剂B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2⑻℃保存
终止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2⑻℃保存
浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2⑻℃保存样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10⑵0分钟，离心20分钟左右（2000⑶000转/分）。仔细搜集上清，保存进程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10⑵0分钟后，离心20分钟左右（2000⑶000转/分）。仔细搜集上清，保存进程中如有沉淀构成，应当再次离心。
3. 尿液：用无菌管搜集，离心20分钟左右（2000⑶000转/分）。仔细搜集上清，保存进程中如有沉淀构成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成分时，用无菌管搜集。离心20分钟左右（2000⑶000转/分）。仔细搜集上清。检测细胞内的成分时，用PBS（PH7.2⑺.4）稀释细胞悬液，细胞浓度到达100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成分。离心20分钟左右（2000⑶000转/分）。仔细搜集上清。保存进程中如有沉淀构成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入1定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本熔化后依然保持2⑻℃的温度。加入1定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000⑶000转/分）。仔细搜集上清。分装后1份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本收集后尽早进行提取，提取按相干文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行实验，可将标本放于⑵0℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤：
- 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第1、第2孔中分别加标准品100μl，然后在第1、第2孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第1孔、第2孔中各取100μl分别加到第3孔和第4孔，再在第3、第4孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第3孔和第4孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第5、第6孔中，再在第5、第6孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第5、第6孔中各取50μl分别加到第7、第8孔中，再在第7、第8孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第7、第8孔中分别取50μl加到第9、第10孔中，再在第9第10孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第9第10孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为12 mU/L，8mU/L ，4 mU/L，2 mU/L， 1 mU/L）。加样：分别设空白孔（空白对比孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终究稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：谨慎揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟之内进行。
- 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15⑶0分钟后方可以使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并常常校订其准确性，以免实验误差。1次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物资含量太高（样本OD动平衡试验机值大于标准品孔第1孔的OD值），请先用样品稀释液稀释1定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限1次性使用，以免交叉污染。底物请避光保存。严格依照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按沾染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。