大鼠胰岛素(Insulin)ELISA试剂盒说明书
点击:次 日期:2017-1-1
试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
1份
封板膜
2片(48)
2片(96)
密封袋
1个
1个
酶标包被板
1×48
拉力试验机text-align:center">1×96
2⑻℃保存
标准品:18mU/L
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2⑻℃保存
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2⑻℃保存
酶标试剂
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2⑻℃保存
样品稀释液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2⑻℃保存
显色剂A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2⑻℃保存
显色剂B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2⑻℃保存
终止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2⑻℃保存
浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
2⑻℃保存样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10⑵0分钟,离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清,保存进程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10⑵0分钟后,离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清,保存进程中如有沉淀构成,应当再次离心。
3. 尿液:用无菌管搜集,离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清,保存进程中如有沉淀构成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成分时,用无菌管搜集。离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清。检测细胞内的成分时,用PBS(PH7.2⑺.4)稀释细胞悬液,细胞浓度到达100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成分。离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清。保存进程中如有沉淀构成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入1定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本熔化后依然保持2⑻℃的温度。加入1定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清。分装后1份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本收集后尽早进行提取,提取按相干文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行实验,可将标本放于⑵0℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤:
- 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第1、第2孔中分别加标准品100μl,然后在第1、第2孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第1孔、第2孔中各取100μl分别加到第3孔和第4孔,再在第3、第4孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第3孔和第4孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第5、第6孔中,再在第5、第6孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第5、第6孔中各取50μl分别加到第7、第8孔中,再在第7、第8孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第7、第8孔中分别取50μl加到第9、第10孔中,再在第9第10孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第9第10孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为12 mU/L,8mU/L ,4 mU/L,2 mU/L, 1 mU/L)。加样:分别设空白孔(空白对比孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽可能不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。洗涤:谨慎揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟之内进行。
- 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15⑶0分钟后方可以使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器,并常常校订其准确性,以免实验误差。1次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物资含量太高(样本OD动平衡试验机值大于标准品孔第1孔的OD值),请先用样品稀释液稀释1定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。封板膜只限1次性使用,以免交叉污染。底物请避光保存。严格依照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按沾染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。